Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Бычья сыворотка, применяемая при приготовлении и хранении клеточных культур, должна тестироваться и быть стерильной и не зараженной бычьими вирусами, в особенности вирусом бычьей диареи и микоплазмами.
Трипсин, используемый при приготовлении клеточных культур, должен проверяться и быть стерильным и не зараженным микоплазмами и вирусами, в особенности пестивирусами и парвовирусами
Посев клеток. Данные, необходимые для оценки пригодности посева клеток, включают информацию об источнике, истории и характеристике, где это возможно.
Источник посева клеток. Для человеческих клеточных культур записывается следующая информация о доноре: этническое и географическое происхождение, возраст, пол, общее физиологическое состояние, использованная ткань или орган, результаты каких-либо тестов на наличие патогенов.
Для животных клеточных культур записывается следующая информация об источнике клеток: вид, штамм, условия разведения, географическое происхождение, возраст, пол, общее физиологическое состояние, использованная ткань или орган, результаты каких-либо тестов на наличие патогенов.
Клетки нейронального происхождения, такие как нейробластома и линии клеток Р12, которые могут репродуцироваться возбудителем губчатообразной энцефалопатии (их клетки чувствительны к прионам), не могут быть использованы для производства вакцин.
История посева клеток. Записывается следующая информация: метод, используемый для изоляции посева клеток, и любые другие процедуры, применяемые для создания контрольного банка клеток, в особенности те, которые могут подвергнуть клетки воздействию посторонних веществ.
Возможно, что полная информация об источнике происхождения культуры клеток неизвестна. Где это оправдано и разрешено, банки культур клеток с использованием таких культур, могут применяться в производстве таких вакцин.
Характеристика посева клеток. Следует изучить следующие свойства:
(1) природу клеток (например, изоферменты, серология, состав нуклеиновой кислоты);
(2) характеристики роста клеток и их морфологические свойства (световые и электронные микроскопы);
(3) для диплоидных клеток - кариотип;
(4) для диплоидных штаммов клеток - продолжительность жизни in vitro, выраженная в уровне удвоения популяции.
Стабильность субстрата клеток. Необходимо продемонстрировать соответствующую жизнестойкость культур клеток в предполагаемых условиях хранения. Чтобы конкретный продукт мог быть подготовлен в культурах клеток,
7
необходимо продемонстрировать, что последовательное производство может быть достигнуто с клетками на уровнях перехода в начале и в конце предполагаемого срока использования.
Посторонние возбудители инфекций. Культур клеток для производства вакцин не должны иметь посторонних возбудителей инфекций. Тесты на выявление посторонних веществ проводятся, как показано в Таблице 5.2.3.-1.
В зависимости от происхождения и культуральной истории культур клеток может потребоваться провести тесты на конкретные выбранные потенциальные контаминанты, в особенности те, о которых известно, что они инфицируют вид, от которого взяты клетки, в латентной форме, например, обезьяний вирус 40 у макак-резусов. Для культур клеток, произошедших от грызунов, для определения вирусов, характерных для конкретных видов, проводят тесты на выработку антител на мышах, крысах и хомяках.
Ниже описано, как культур клеток анализируются на наличие ретровирусов. Колонии клеток, в которых обнаружено присутствие ретровирусов, способных размножаться, не подходят для производства вакцин.
Опухолеродность. Культура клеток для приготовления живых вакцин не должна вызывать новообразований на любом уровне удвоения популяции, используемом для производства вакцин. Если для производства других типов вакцин используется культур клеток, вызывающая новообразования, процесс очистки должен демонстрировать, что остаточное количество клеток-субстратов ДНК снижено до 10 нг на одну человеческую дозу вакцины, кроме случаев, когда предусмотрено иное, и что количество клеткок-субстратов белка снижено до приемлемого уровня.
Культура клеток, о которой известно, что она может вызывать новообразования, не нуждается в дальнейшем тестировании. Если культур клеток имеет опухолеродный потенциал неизвестного характера, ее либо рассматривают как опухолеродную, либо проверяют на опухолеродность с использованием теста in vitro, описанного ниже. Если результат теста in vitro отрицательный или неопределенно положительный, проводится приведенный ниже тест in vivo. Тесты проводятся с использованием клеток на максимальном уровне удвоения популяции, который будет применяться при производстве вакцин, или за его пределами.
Культуры клеток MRC-5, WI-38 и FRhL-2 признаны неопухолеродными и не требуют дополнительного тестирования.
Хромосомная характеристика. Необходимо доказать, что диплоидный штамм клеток имеет диплоидный набор хромосом. Если удаление неповрежденных клеток во время обработки после сбора не подтвердилось, необходимо провести более детальную характеристику диплоидной колонии клеток при помощи анализа кариотипа. Необходимо исследовать пробы из четырех пересевах, равномерно распределенных по всей протяженности жизни колонии клеток. Для точного подсчета хромосом и частоты гиперплоидии, гипоплоидии, полиплоидии, повреждений и структурных аномалий следует исследовать минимум 200 клеток в метафазе.
